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親和層析介質(zhì)的工作原理是怎樣的?

更新時(shí)間:2022-09-05點(diǎn)擊次數(shù):1222
  親和層析是一種根據(jù)生物分子之間的特異相互作用來(lái)分離蛋白的層析方法,如酶和底物、受體和配體、抗體和抗原。這種作用是特異性的也是可逆的,通過(guò)這種可逆的結(jié)合和分離來(lái)達(dá)到蛋白純化的目的。
  
  生物分子與親和層析介質(zhì)上的配體通過(guò)共價(jià)鍵、范德華力、疏水力、靜電力等作用發(fā)生生物學(xué)專(zhuān)一性結(jié)合形成復(fù)合物,共價(jià)鏈接在載體表面的功能團(tuán)配體上。
  
  蛋白質(zhì)親和層析技術(shù)通過(guò)目標(biāo)蛋白質(zhì)與配體間通過(guò)特異性親和力吸附而達(dá)到分離純化的目的,具有生物專(zhuān)一性的特點(diǎn),純化效率高。
  
  親和層析是應(yīng)用生物高分子與配基可逆結(jié)合的原理,將配基通過(guò)共價(jià)鍵牢固結(jié)合于載體上而制得的層析系統(tǒng)。這種可逆結(jié)合的作用主要是靠生物高分子對(duì)它的配基的空間結(jié)構(gòu)的識(shí)別。
  
  常用的生物親和關(guān)系有酶-底物、底物類(lèi)似物、抑制劑、激活劑、輔因子,抗體-抗原,激素-受體蛋白、載體蛋白,外源凝集素-多糖、糖蛋白、細(xì)胞表面受體,核酸-互補(bǔ)核苷酸序列、組蛋白、核酸結(jié)合蛋白等,具有高效、簡(jiǎn)單、快速的優(yōu)點(diǎn),是當(dāng)前理想的分離純化蛋白的方法。
  
  親和填料由三個(gè)部分組成的,主要是多孔球形基架,間隔臂及配基,根據(jù)配基特異性的不同親和填料分幾種,Ni柱純化,GST親和層析介質(zhì),麥芽糖結(jié)合蛋白和ProteinL親和層析介質(zhì)等。
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