在生物制藥領域，層析純化是關鍵步驟，親和層析介質(zhì)循環(huán)使用次數(shù)直接影響分離提純效果。根據(jù)不同產(chǎn)品特性和物料性質(zhì)，介質(zhì)壽命均不相同。
本文以金屬螯合鎳親和介質(zhì)為例，通過金屬螯合親和介質(zhì)的原理與使用方式，來檢測介質(zhì)壽命。金屬螯合親和介質(zhì)捕獲蛋白質(zhì)表面的氨基酸，分離出對金屬離子有吸附作用的多肽、蛋白和核苷酸。針對其純化原理，研究介質(zhì)壽命驗證方法與清洗檢測，為研究不同用途的層析介質(zhì)壽命提供思路與數(shù)據(jù)支持。
介質(zhì)壽命驗證是藥品研發(fā)，尤其是生物制品的重點關注內(nèi)容。企業(yè)在做介質(zhì)壽命驗證時，建議采用等比例縮小純化規(guī)模，確定每步純化所用介質(zhì)的使用次數(shù)，確保親和層析介質(zhì)壽命在使用期限內(nèi)使用，介質(zhì)符合生產(chǎn)需求，防止交叉污染，保障產(chǎn)品的質(zhì)量合格。
親和層析介質(zhì)在每次使用時，未被洗脫和流穿的物質(zhì)或雜質(zhì)會吸附在填料上，需要采用特定的清洗和再生程序?qū)游鼋橘|(zhì)進行清洗、再生、保存，以恢復介質(zhì)開始的狀態(tài)。長期使用的介質(zhì)，會逐漸失去效力，如清洗后污染物殘留量、介質(zhì)使用參數(shù)變化、產(chǎn)品重要指標（純度）和收率均不在控制范圍之內(nèi)，則說明介質(zhì)的壽命已到期。
親和層析是一種吸附層析，抗原（或抗體）和相應的抗體（或抗原）發(fā)生特異性結合，而這種結合在一定的條件下又是可逆的。所以將抗原（或抗體）固相化后，就可以使存在液相中的相應抗體（或抗原）選擇性地結合在固相載體上，借以與液相中的其他蛋白質(zhì)分開，達到分離提純的目的。
與產(chǎn)品實際生產(chǎn)的SOP作對比，如不在SOP控制范圍內(nèi)，則說明介質(zhì)應該更換了，只有對親和層析介質(zhì)進行及時更換，才能確保生物制品質(zhì)量。
本次研究結果顯示，TOC檢測值范圍在22.700～262.000ppb之間，RSD為77.027%；pH檢測值范圍在5.400～6.900之間，RSD為7.103%；內(nèi)毒素檢測值范圍在0.600～1.100EU/mL之間，RSD為9.443%；蛋白未檢出，電導均＜0.25μs/cm；TOC洗脫峰圖波動明顯，pH洗脫峰圖稍有波動，但都電導洗脫峰圖相對平穩(wěn)。
結果表明，雖然TOC和pH峰圖存在一定波動，但其檢測值均處于正常標準范圍內(nèi)，另外內(nèi)毒素作為輔助參考指標，zui高值達到1.100EU/mL，已超出標準范圍，但檢測難免存在誤差，經(jīng)計算內(nèi)毒素平均值僅為0.967EU/mL，符合標準范圍。
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更新時間：2023-02-10
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